有機化學人才網 | 最新人才 | 最新職位 | 技術交易 | 藥物合成
 
   
全站搜索: |
  您當前位置:網站首頁 >> 論壇文摘 >> 關于Tris-HCl的問題
 
 
關于Tris-HCl的問題
2010-08-23 17:27:13 來源:不詳 瀏覽:19871

要開始做自己的學生課題了,第一次接觸Tris-HCl,只知道它是緩沖液,不知道它是什么東東,如何配置?;骨氪蠹掖徒?!謝!

wzuny (2004-11-15 20:50:00)

Tris-HCl是生化常用試劑,做合成的很少用。。。。

看下面的東東對你有沒有用?

實驗室常用溶液的配制一.常用貯液與溶液

1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學試劑級,無DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動,直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃?;蜃?00mg的二硫蘇糖醇至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

1mol/L氯化鉀(KCl):溶解7.46g氯化鉀于足量的水中,加水定容到100ml。

3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三鈉鹽?;虺迫?86.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

1mol/L HEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。

100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調pH至7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套)

5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。

10N氫氧化鈉(NaOH):溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。

100%三氯乙酸(TCA):在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。(稀釋液應在臨用前配制)

2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用鋁箔包裹裝液管,貯存于-20℃。

100×Denhardt試劑(Denhardt's regent)

成分及終濃度

配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖(Ficoll,400型)2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA(組分V)水

2g2g2g加水至總體積為100ml

依照上表稱取各組分,溶于水中定容。過濾除菌及雜質,分裝成小份于-20℃貯存。

10×標準DNA連接酶緩沖液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端連接)

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 鹽酸亞精胺(可?。?.5mg/ml BSA(組分V)(可?。┧?

5ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液200ul 100 mmol/L 貯液50ul 1 mmol/L 貯液0.5ml 10 mg/mL 貯液2.25ml

將配制好的緩沖液分裝成小份,貯存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液,-80℃可貯存至少6個月。

10mmol/L dNTP混合液

成分及終濃度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水

2ul 100 mmol/L dATP 貯液2ul 100 mmol/L dCTP 貯液2ul 100 mmol/L dGTP 貯液2ul 100 mmol/L dTTP 貯液12ul

20%PEG 8000/2.5M NaCl

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分的用量

質量濃度為20%聚乙二醇2.5mol/L 氯化鈉水

20g50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉補足100ml

加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中,加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解。

20×SSC

成分及終濃度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L 檸檬酸三鈉(二水)3mol/L 氯化鈉水

88.2g175.3g補足1L

溶解檸檬酸三鈉(二水)和氯化鈉于約0.9L水中,加幾滴10N NaOH溶液調pH為7.0,用水補足體積至1L。

DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的體積分數為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應,不可用DEPC處理Tris緩沖液。

甲酰胺(deionized formamide)直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份,充氮氣于-80℃貯存(防止氧化)。

磷酸緩沖液(phosphate buffer)按照下表所給定的體積,混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿)貯液,獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)貯液:溶解138g于足量水中,使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。

1mol/L 磷酸二氫鈉(ml)

1mol/L 磷酸氫二鈉(ml)

最終pH值

877850815775735685625565510450390330280

123150185225265315375435490550610670720

6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2

TE(用于懸浮和貯存DNA)

成分及終濃度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/L Tris-HCl1mmol/L EDTA水

1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)98.8ml

Tris緩沖液(Tris-HCl buffer)將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中,再根據所要求的pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N),用水調整終體積至1L。

濃鹽酸的體積(ml)

pH

8.6142128.53846566671.376

9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2

二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液

電泳緩沖液

50×Tris-乙酸(TAE)緩沖液

成分及終濃度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/L Tris堿1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水

242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)補足1L

5×Tris-硼酸(TBE)緩沖液

成分及終濃度

配制1L溶液各成分的用量

445 mmol/L Tris堿445 mmol/L 硼酸鹽10 mmol/L EDTA水

54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)補足1L

染料

1%溴酚藍(bromophenol blue)加1g水溶性鈉型溴酚藍于100ml水中,攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙錠(ethidium bromide)小心稱取1g溴化乙錠,轉移到廣口瓶中,加100ml水,用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管,于4℃貯存。

凝膠上樣液(gel loading solutions)6×堿性凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.3 N 氫氧化鈉6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%溴甲酚綠0.25%二甲苯青FF水

300ul 10N 氫氧化鈉120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg補足到10ml

6×聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚藍0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖(400型)水

1.5ml 1%溴酚藍1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.5g補足到10ml

6×溴酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.25%溴酚藍0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(400型)水

2.5ml 1%溴酚藍2.5ml 1%二甲苯青FF1.5g 補足到10ml

6×甘油凝膠上樣液(4℃貯存)

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚藍0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水

1.5ml 1%溴酚藍1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)3ml 3.9ml

6×蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚藍0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水

1.5ml 1%溴酚藍1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)4g 補足到10ml

10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.2%溴酚藍0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1%SDS50%甘油 水

20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10% SDS5ml補足到10ml

三.常用培養基

LB培養基將下列組分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

10g

酵母提取物

5g

氯化鈉

10g

如果需要用1N NaOH(~1ml)調整pH至7.0,再補足水至1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

SOB培養基將下列組分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

20g

酵母提取物

5g

氯化鈉

0.5g

1 mol/L 氯化鉀

2.5ml

用水補足體積到1L。分成100ml的小份,高壓滅菌。培養基冷卻到室溫后,再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。

SOC培養基成分、方法同SOB培養基的配制,只是在培養基冷卻到室溫后,除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外,再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中,再用水補足到100ml,用0.22um的濾膜過濾除菌)。

TB培養基將下列組分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃,再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)。

2×YT培養基將下列組分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

16g

酵母提取物

10g

氯化鈉

4ml

如果需要用1N NaOH(~1ml)調整pH至7.0,再補足水至1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

YPD培養基將下列組分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

20g

酵母提取物

10g

葡萄糖

20g

用水補足體積為1L后,高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前,對色氨酸營養缺陷型每升培養基添加1.6g色氨酸,因為YPD培養基是色氨酸限制型培養基。為了配制平板,需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。

四.常用抗生素

氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養基。

卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

四環素(tetracyyline)(10mg/ml)溶解100mg四環素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無堿的四環素溶于無水乙醇,定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光,于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

wzuny (2004-11-15 20:53:00)

溶液的配制:

Tris-HCl緩沖液:pH=8.20,c=150mmol/L,V=100mL;

50 mL150 mmol/L Tris堿溶液與22.9 mL150 mmol/LHCl溶液混合后加入去離子水定容至100mL。

看看下面這個鏈接,各種不同PH值的都有,更詳細些: //www.cclis.com/lab.asp?Id=950

zhuzhonghua (2004-11-16 10:06:00)
要買TRIS(三羥甲基氨基甲烷)嗎?我這里有。
hjspeeder (2004-11-20 11:29:00)
用過一次,是用來提取RNA的,具體的不是太清楚!
fengzi913 (2007-7-26 13:22:00)

按摩爾數配好tris堿后滴加鹽酸,用PH計控制你需要的PH值

緩沖溶液,一般它的PH都調到8左右

有機化學人才網,招聘求職的最佳選擇!
有機化學論壇 -- 討論技術難題、分享技術資料、評價企業信用、發布供求信息
  

上一篇:[求助][討論]用甲胺醇溶液替代甲胺水溶液進行胺化,可以嗎?
下一篇:催化劑用法,偶不懂!

共有0人對本文發表評論(網友評論僅供表達個人看法,并不表明本站同意其觀點或證實其描述)
評論:關于Tris-HCl的問題
請發表評論,請注意文明用語!
您的昵稱:
評論內容:
驗 證 碼:

 
按分類瀏覽
技術文章化工新聞
醫藥新聞學術會議
行業展會化學專家
化學百科化合物詞典
論壇文摘
熱門文章
pKa和pKb分別是什么意思?
【求助】濕法裝柱,干法上樣的詳
【求助】氨基和羧基縮合 反應條件
[原創]OTs, OMs, OTf的離去性能
轉貼:常壓沸點與減壓沸點換算有
有機化學博士的就業怎么樣?
請問產率怎么計算
[求助]Fischer投影式的改寫及RS構
【討論】氨基與環氧基團反應的條
萃取時飽和食鹽水的作用是什么?
 友情鏈接
有機化學人才網  
今日江苏快3开奖结果走势图 | 廣告服務 | 建站服務 | 關于我們 | 今日江苏快3开奖结果走势图 | 版權聲明